1.適用範圍：本檢驗方法適用於酒類中葉黃素（lutein）之檢驗。


2.檢驗方法：高效液相層析法（high performance liquid chromatogra-
  phy ，HPLC）。
2.1.裝置：
2.1.1.高效液相層析儀：
2.1.1.1.檢出器：光二極體陣列檢出器（photodiode array  detector）
        。
2.1.1.2.層析管：YMCTM Carotenoid C30，5  μm，內徑 4.6 ×250 mm 
        或同級品。
2.1.2.旋渦混合器（Vortex mixer）。
2.2.試藥：甲基第三丁基醚（tert-butyl methyl  ether）、乙酸乙酯及
    甲醇採用層析級；葉黃素對照用標準品。
2.3.器具及材料：
2.3.1.容量瓶：100 mL，褐色。
2.3.2.離心管：50 mL，PP 材質。
2.3.3.濾膜：孔徑 0.45  μm，Nylon 材質。
2.4.移動相溶液之調製：
2.4.1 移動相溶液 A：甲醇。
2.4.2 移動相溶液 B：甲醇、甲基第三丁基醚及水以 6：90：4 （v/v/v
      ）比例混合，以濾膜過濾，取濾液作為移動相溶液 B。
2.5.標準溶液之配製：
    取葉黃素對照用標準品約 5  mg，精確稱定，以甲基第三丁基醚：甲
    醇（１：１， v/v）溶液定容至  100 mL，作為標準原液。使用時再
    以甲基第三丁基醚：甲醇（１：１， v/v）溶液稀釋成 1.0～15.0mg
    /L，供作標準溶液。
2.6.標準曲線之製作：
    精確量取 2.5. 節之標準溶液各 20  μL，參照下列條件進行液相層
    析，就葉黃素波峰面積與對應之葉黃素濃度，製作標準曲線。

    高效液相層析測定條件：
    層析管：YMCTM Carotenoid C30，5  μm，內徑 4.6×250 mm
    光二極體陣列檢出器：波長 450  nm
    移動相溶液：A 液與 B  液以下列條件進行梯度分析
                ────────────────────────
                時間（min）     A 液（％）  B 液（％）
                 0.0→10.0      99→90        1→10
                10.0→20.0      90→70       10→30
                20.0→30.0      70→0        30→100
                30.0→35.0       0→99      100→1
                35.0→40.0      99→99        1→1

    移動相流速：1.0 mL/min
2.7.檢液之調製：
    精確量取檢體 10 mL，置於離心管中，加入乙酸乙酯 10 mL，以旋渦
    混合器震盪 15 秒，靜置分層，取上層液，以濾膜過濾，供作檢液。
    註：2.5.  及 2.7. 節之實驗須在避光下進行。
2.8.鑑別試驗及含量測定：
    精確量取檢液及標準溶液各 20μL，分別注入高效液相層析儀中，參
    照 2.6  節條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時
    間及吸收圖譜比較鑑別之，並由標準曲線求得檢體中葉黃素之含量（
    mg/L）。

附註：
1.本檢驗方法之檢出限量為 0.003  mg/L。
2.酒類中有影響檢驗結果之物質時，應自行探討。